蘇州千舍生物小課堂：“胎牛血清知多少”

?胎牛血清知多少？

血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體，是血漿去除纖維蛋白原后的混合物。主要成分包括蛋白質、氨基酸、糖類和維生素、多肽（如生長因子、胰島素、促生長激素）等。血清是細胞培養過程重要的營養物質，同時也對細胞起到一定的保護作用。

?胎牛血清重復凍存和解凍

經過5次解凍/凍存循環的血清在細胞生長性能、生化分析數據和濁度方面沒有明顯的變化，我們認為血清經多次解凍/凍存循環（可達5次）之后，不會影響細胞的生長。雖然測定數據顯示，經過多達5次解凍/凍存血清性能并未出現明顯的下降，但反復凍融會造成血清的沉淀增多，給后續處理帶來麻煩，我們建議血清的解凍/凍存次數越少越好。

?胎牛血清儲存和使用方法

我們建議血清儲存在-10℃或更低溫度條件下。產品效期是基于-10℃儲存條件的穩定性研究。然而，研究表明儲存在-80℃下的血清，在性能方面也沒有任何變化，但我們建議不要在-80℃條件下儲存，解凍時巨大的溫差會導致更多沉淀的產生。一旦解凍，血清可在2-8℃條件下儲存6周，且維持產品質量。如果解凍之后的血清儲存時間大于6周，我們建議分裝成合適的體積并重新凍存。

?胎牛血清解凍方法

首先將凍存的血清移到2-8℃的冰箱中，過夜；于37℃水浴，間歇性搖晃混勻底部的溶解物。解凍之后的血清不要長時間放置在37℃下。若血清沒有混勻且放置于高于40℃的水浴中，底部的蛋白會變性形成沉淀。不推薦高溫解凍血清。在解凍或長時間儲存之后，血清中會出現渾濁物和絮狀物。在解凍過程中，需不斷的搖晃混合以阻止形成梯度及沉淀。由于血清的不同成分解凍速率不同，當解凍時，若無混合操作，會形成一個梯度。如果血清一直保持此梯度狀態，隨后會形成沉淀。

?后再給大家帶點福利，認清血清沉淀的“真面目”：

1、用于細胞培養的胎牛血清及其它血清產品存在各種類型的沉淀。除了膽固醇和一些蛋白沉淀之外，血清中也會含有纖維蛋白和磷酸鈣。雖然沉淀可引起初始問題，但在細胞培養應用方面，沉淀不會對血清的性能產生影響。

2、纖維蛋白

清中的纖維蛋白通常為肉眼可見的較大物質（可達1-2 mm）。由于血清在低溫條件下收集并迅速加工處理，導致一些纖維蛋白原（纖維蛋白的前體）仍存在于溶液中。在過濾之后，血清中的纖維蛋白凝固并沉淀。

3、磷酸鈣

磷酸鈣也是血清產品中常見的沉淀，通常表現為云狀物。倒置顯微鏡觀察，發現許多小黑點。由于布朗運動，這些黑點可自由移動。

磷酸鈣沉淀物通常被誤認為微生物污染。在37℃孵育之后，血清中的磷酸鈣沉淀物會增加。因此，我們建議不要直接用37℃孵育的血清測試無菌性。將1 mL的待測血清直接傾倒于細菌瓊脂平板（例如胰酪蛋白胨大豆瓊脂），37℃培養之后觀察菌落的生長情況。油鏡（放大1000倍）下觀察革蘭氏染色，判斷是否污染。

?細胞生長

測試及經驗表明，沉淀不會改變血清作為培養基添加物的性能。這已經被客戶及其它廠家證實。

過濾

如果血清中含有大量的沉淀，我們不建議進行過濾血清。若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管中，以400g稍微離心，上清液可接著加入培養基內一起過濾。

沉淀物的控制

血清中的沉淀很難預測和阻止，沉淀不會改變血清的性能，但在正確的儲存和使用操作會降低血清中沉淀的析出。

如下條件會增加沉淀：

  •血清熱滅活；

  •37℃孵育；

  •重復凍存與解凍操作；

  •解凍工程中為未混合；

  •γ-輻照；