胎牛血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理?

血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理?

近期，有些客戶再使用我司胎牛血清過程中，發現血清融化后有些許沉淀（類似頭皮屑的東西），擔心影響質量，不敢使用！莫怕，莫怕，小編搜集了些資料，供大家參考！

血清中沉淀物的出現有許多種原因，

但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。

但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。

若欲去除這些絮狀沉淀物，

可將血清分裝至無菌離心管內，以400轉/分離心1-2分鐘,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。

盡量不使用過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。

在解凍血清時，建議隨時將血清搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

各個大佬也有相關說明，如圖：

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胎牛血清保存方法

血清應保存在-5℃至-20℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議將無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

a、如何解凍血清才不會使產品質量受損？

將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過程中必須規則地搖晃均勻。

b、避免產生沉淀物

1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實驗顯示非常容易產生沉淀物。

2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生

3、請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。

4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

5、若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。 血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理?　欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。

c、何謂熱滅活

一般是以56℃，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應有:溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。

d、有必要做熱滅活嗎

實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察，像是 "小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。購買的時候注意詢問廠家是否是已滅活血清。

e、保存注意事項

（1）需要長期保存的血清必須儲存于-20℃至- 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。

（2）熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過程中須規則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補體成分滅活。除非必須，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多，而且還會影響血清的質量。補體參與反應有：細胞毒作用，平滑肌細胞收縮，肥大細胞和血小板釋放組胺，增強吞噬作用，促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化。

（3）瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一，減少沉淀的發生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍，這樣因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。

（4）一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾，切勿直接過濾血清。

（5）血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量。可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下“小黑點”:經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長，但如果懷疑血清質量，則應立即停止使用,更換另一批號的血清。

（6）切勿將血清在37℃放置太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質量。

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