細胞生長不良常見原因及解決方案

儲存培養物質量不佳

確保正確識別了用于儲存的起始培養物，該培養物是健康的，無微生物污染的，并且處于生長的對數階段后期（80-90%匯合度）

儲存物冷凍不當

在液氮中冷凍細胞時2，請確保細胞、培養基和其他實際的濃度以及冷凍方案遵循供應商的建議。通常，應以每分鐘約1至3℃的速度緩慢凍結，以大程度地減少冰晶的形成。

為細胞選擇最合適的冷凍保護劑。如果使用甘油，請勿將其儲存在光線下，因為光照會使甘油轉化為具有細胞毒性的烯醛。

儲存物保存不當

存儲物應始終保持在低于-130℃的溫度下，理想狀況是在液氮中。

儲存物解凍不當

解凍細胞時，請遵循供應商推薦的方案。通常細胞應該迅速解凍，需使用預熱的介質。

盡快除去含有冷凍保護劑的培養基，以防止細胞活性下降。

確保小心處理細胞，不要進行渦旋和高速離心，因為細胞在凍存后特別容易受到損傷。

在塑料培養容器上的靜電積聚（尤其是在低濕度的情況下）

增加室內溫度。用（消毒過的）濕毛巾擦拭培養器皿外部。使用放靜電裝置

細胞、培養基和/或其他試劑混合不充分

確保細胞和所有試劑的溶液充分混合

滾瓶的轉動太快

以緩慢的速度旋轉瓶子

細胞傳代次數過多

取用一個新的傳代培養基次數較少的存儲細胞

收獲時細胞過度匯合

使用新的存儲細胞開始培養，并在達到100%匯合度之前的對數期進行收獲。

CO₂水平與所用培養基的碳酸氫鹽緩沖系統需求的不匹配，導致對PH控制不足。

確保培養瓶中的CO₂水平符合緩沖系統中的需求。通常，緩沖液中碳酸氫鹽濃度越高，培養箱中氣體混合物所需的CO₂濃度越高。

將培養物暴露于熒光下導致光敏感的培養基組分（核黃素、色氨酸和HEPES）轉化為有細胞毒性的自由基和H₂O₂。

將細胞和培養基放在暗處，避開熒光。

錯誤的細胞計數法

確保計數樣品混合充分，以避免細胞密度局部差異影響細胞計數的準確性。再次檢查使用細胞計數器手動方法的所有運算，或者考慮自動細胞計數方法。

容器內細胞、培養基混合不充分

通過輕輕渦旋確保細胞混合物和所有試劑適當混勻，移液管吹打以避免局部濃度差異。

同一時期相同的器皿之間的細胞生長不均勻可能是由于培養箱內的溫度差異。

盡可能避免將培養器皿堆疊放置，因為底部的培養器皿最靠近金屬架，可能升溫最快。