細(xì)胞生長不良常見原因及解決方案

儲存培養(yǎng)物質(zhì)量不佳

確保正確識別了用于儲存的起始培養(yǎng)物，該培養(yǎng)物是健康的，無微生物污染的，并且處于生長的對數(shù)階段后期（80-90%匯合度）

儲存物冷凍不當(dāng)

在液氮中冷凍細(xì)胞時2，請確保細(xì)胞、培養(yǎng)基和其他實際的濃度以及冷凍方案遵循供應(yīng)商的建議。通常，應(yīng)以每分鐘約1至3℃的速度緩慢凍結(jié)，以大程度地減少冰晶的形成。

為細(xì)胞選擇最合適的冷凍保護(hù)劑。如果使用甘油，請勿將其儲存在光線下，因為光照會使甘油轉(zhuǎn)化為具有細(xì)胞毒性的烯醛。

儲存物保存不當(dāng)

存儲物應(yīng)始終保持在低于-130℃的溫度下，理想狀況是在液氮中。

儲存物解凍不當(dāng)

解凍細(xì)胞時，請遵循供應(yīng)商推薦的方案。通常細(xì)胞應(yīng)該迅速解凍，需使用預(yù)熱的介質(zhì)。

盡快除去含有冷凍保護(hù)劑的培養(yǎng)基，以防止細(xì)胞活性下降。

確保小心處理細(xì)胞，不要進(jìn)行渦旋和高速離心，因為細(xì)胞在凍存后特別容易受到損傷。

在塑料培養(yǎng)容器上的靜電積聚（尤其是在低濕度的情況下）

增加室內(nèi)溫度。用（消毒過的）濕毛巾擦拭培養(yǎng)器皿外部。使用放靜電裝置

細(xì)胞、培養(yǎng)基和/或其他試劑混合不充分

確保細(xì)胞和所有試劑的溶液充分混合

滾瓶的轉(zhuǎn)動太快

以緩慢的速度旋轉(zhuǎn)瓶子

細(xì)胞傳代次數(shù)過多

取用一個新的傳代培養(yǎng)基次數(shù)較少的存儲細(xì)胞

收獲時細(xì)胞過度匯合

使用新的存儲細(xì)胞開始培養(yǎng)，并在達(dá)到100%匯合度之前的對數(shù)期進(jìn)行收獲。

CO₂水平與所用培養(yǎng)基的碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)需求的不匹配，導(dǎo)致對PH控制不足。

確保培養(yǎng)瓶中的CO₂水平符合緩沖系統(tǒng)中的需求。通常，緩沖液中碳酸氫鹽濃度越高，培養(yǎng)箱中氣體混合物所需的CO₂濃度越高。

將培養(yǎng)物暴露于熒光下導(dǎo)致光敏感的培養(yǎng)基組分（核黃素、色氨酸和HEPES）轉(zhuǎn)化為有細(xì)胞毒性的自由基和H₂O₂。

將細(xì)胞和培養(yǎng)基放在暗處，避開熒光。

錯誤的細(xì)胞計數(shù)法

確保計數(shù)樣品混合充分，以避免細(xì)胞密度局部差異影響細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性。再次檢查使用細(xì)胞計數(shù)器手動方法的所有運算，或者考慮自動細(xì)胞計數(shù)方法。

容器內(nèi)細(xì)胞、培養(yǎng)基混合不充分

通過輕輕渦旋確保細(xì)胞混合物和所有試劑適當(dāng)混勻，移液管吹打以避免局部濃度差異。

同一時期相同的器皿之間的細(xì)胞生長不均勻可能是由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度差異。

盡可能避免將培養(yǎng)器皿堆疊放置，因為底部的培養(yǎng)器皿最靠近金屬架，可能升溫最快。