如何確認細胞交叉污染

交叉污染雖不如微生物污染普遍，但與HELA細胞及其他生長迅速的細胞系間廣泛的交叉污染是個明確的問題，會造成嚴重后果。

從聲譽好的細胞庫獲取細胞系、定期檢查細胞系性質及采用良好的無菌技術有助于避免交叉污染。

通過DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可確認有無交叉污染。

血清與培養基

通常血清的添加比例為10%，當然也可根據細胞狀態和生長速率適當增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時，最好需對血清的品質進行驗證，防止對實驗造成影響。

對于培養基，目前商品化的比較成熟，穩定性也較好。如若需自配培養基時，過濾前攪拌時間不宜過長（培養基中營養豐富，細菌常溫下20min就可繁殖一代，其代謝產物會對培養細胞培養瓶

目前商品化的細胞培養瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種。其中不帶透氣孔細胞培養瓶擰緊后需適當回旋瓶蓋，保證CO2能順利進入細胞培養瓶。

細胞培養過程中，對于適應能力強的腫瘤細胞，可在傳代3-4次后更換新的細胞培養瓶。對于非腫瘤細胞系如293T，HEK293等細胞，建議每次傳代更換新的細胞培養瓶來保證細胞狀態。

細胞傳代

正常細胞形態較好，輪廓清晰，邊緣透亮，細胞增殖狀況良好。當貼壁細胞長到密度90%時，需進行傳代。

傳代時通常使用胰酶消化法。該方法又分為干消化法和濕消化法。

干消化法：胰酶浸潤后棄去胰酶，待細胞變圓后加入新鮮培養基吹下后再進行細胞傳代。

濕消化法：待細胞變圓，肉眼觀察下成流沙狀脫落時即可加入新鮮培養基終止消化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養基重懸傳代。

吹打細胞時，手法要輕柔，避免吹打出氣泡，造成細胞因內外壓差破裂，同時需避免刮到壁影響細胞的貼壁。

不同細胞的貼壁能力不同，消化時間不同；不同細胞細胞間連接強度不一樣，消化時間不同；同一細胞生長狀狀況不同，消化時間不同。消化時適時觀察細胞形態，避免因過度消化影響細胞活性。

傳代間隔時間和傳代比例因細胞而異。細胞傳代過程中，當細胞出現狀態不好或者污染時及時棄去細胞，重新復蘇。

細胞凍存與復蘇

當細胞生長狀況較好或者代數較早時，需及時大量的凍存。

細胞凍存液比例為培養基：血清：DMSO=7:2:1，也可血清：DMSO=9:1。細胞凍存密度通常為1-3×106個/ml。細胞凍存采用慢凍方式，減少冰晶形成，避免細胞損傷。通常4℃放置0.5 h，-20℃放置2 h，-80℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。

細胞復蘇時升溫要快，防止在解凍過程中水分進入細胞，形成冰晶，影響細胞存活。38℃水浴不時搖動，在1分鐘內使其*融化，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養基重懸移入培養瓶中。

用真誠感動細胞

俗話說，心誠則靈。對待細胞培養也應如此，“自己要用的細胞自己養"，多去觀察細胞生長狀態。