如何選擇ELISA試劑盒

ELISA試劑盒又稱為酶聯免疫試劑盒，用于對液體樣本中的目標物質進行定性和定量檢測。隨著國家對科研項目的重視，在科研單位和廣大科研類院校也越來越受歡迎。

ELISA試劑盒之所以受歡迎和它自身的優點是分不開的。

首先適合檢測的樣本很廣泛包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本，具體根據試劑盒說明書決定，通常檢測靈敏度比較高。

其次ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應結合起來的一種微量分析技術。酶標記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應的特異性，也不改變酶本身的活性。

最后因為ELISA試劑盒操作不依賴昂貴的儀器，且具備準確性高、反應時間短等優點，所以適合大批量的檢測，就連食品檢測行業ELISA試劑盒也備受青睞。

目前市場上的ELISA試劑盒質量參差不齊，如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要，具體有以下幾點可供參考。

除試劑盒特別說明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有：血清和血漿（不同抗凝劑），細胞上清，和細胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用。

也就是標準曲線范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標準曲線范圍內，對于濃度很高的樣本，可以先進行預實驗摸索到比較好的稀釋倍數后再大量測定樣本。

ELISA試劑盒的特異性與試劑盒的關鍵組分--抗體對有關。若抗體對中之一為多抗，另一個必須為單抗，如有條件最好是使用雙單抗。

靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質的低量的能力，用戶可根據自己樣本中待檢指標的含量/濃度選擇合適的試劑盒，如果待檢指標含量很低，一般的試劑盒不能滿足要求，建議選擇高敏的ELISA試劑盒。

科學實驗講求重復性，ELISA試劑盒，其板內和板間變異系數應該控制在15%以內。

試劑盒在保證高質量數據的情況下，實驗時間越短，操作越便利，越容易受到用戶歡迎。

一個品牌不光要有度，更重要的是美譽度。通過行業調查公司以及網絡，相關宣傳資料等可以找到美譽度高的ELISA試劑盒供應商，這個反映的不僅是產品質量的問題，對供應商的售前售后服務也是一個非常嚴格的檢驗。

常見的高美譽度品牌進口的有R&D、Raybiotech、Merck-Millipore、Sigma-Aldrich、Thermo等，國產的有義翹神州、博奧森、neobioscience等。

產品的文獻引用特別是高質量的SCI文章引用是很多用戶都關心的問題，這是業界對產品認可的一個非常重要指標，而且對相關用戶的科研有一定的借鑒作用。

ELISA盒子使用技巧

樣本的準備：盡量使用新鮮樣本，不使用有溶血，被細菌污染、標本保存時間過長和標本凝固不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標本，如不能立即測定，5天之內應4℃保存，對于1周后檢測的樣本應低溫凍存；做好分裝，長時間凍存的樣本避免反復凍融。

仔細閱讀說明書：所有操作嚴格按照說明書。

不同批次的試劑不要混用，檢查各組分的有效期。

預包被的酶標板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需溫度，預防后續實驗中由于孵育溫度或是時間不夠充分，而將一些弱陽性樣本不能檢出。

待測樣本加樣：待檢樣本過多時，建議分批操作；需要稀釋的樣本提前做好稀釋，注意選對合適稀釋液；控制好加樣時間，避免加樣費時過長造成誤差；注意加樣角度，垂直加入孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。

溫育和洗板：溫育時間和溫度一般根據試劑盒的說明書進行選擇。①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢。

顯色：市售ELISA試劑盒中，一般是以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的顯色液，反應條件為37℃或室溫反應15～30 min。顯色反應需要避光。

讀數和數據分析：終止后讀取結果盡量在15min內完成，讀取OD值時酶標儀需先預熱15～30 min再進行。標曲的相關系數（R2）一般需要大于0.99。

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