如何選擇ELISA試劑盒

ELISA試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫試劑盒，用于對液體樣本中的目標物質(zhì)進行定性和定量檢測。隨著國家對科研項目的重視，在科研單位和廣大科研類院校也越來越受歡迎。

ELISA試劑盒之所以受歡迎和它自身的優(yōu)點是分不開的。

首先適合檢測的樣本很廣泛包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本，具體根據(jù)試劑盒說明書決定，通常檢測靈敏度比較高。

其次ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應結(jié)合起來的一種微量分析技術。酶標記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應的特異性，也不改變酶本身的活性。

最后因為ELISA試劑盒操作不依賴昂貴的儀器，且具備準確性高、反應時間短等優(yōu)點，所以適合大批量的檢測，就連食品檢測行業(yè)ELISA試劑盒也備受青睞。

目前市場上的ELISA試劑盒質(zhì)量參差不齊，如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要，具體有以下幾點可供參考。

除試劑盒特別說明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有：血清和血漿（不同抗凝劑），細胞上清，和細胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用。

也就是標準曲線范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標準曲線范圍內(nèi)，對于濃度很高的樣本，可以先進行預實驗摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本。

ELISA試劑盒的特異性與試劑盒的關鍵組分--抗體對有關。若抗體對中之一為多抗，另一個必須為單抗，如有條件最好是使用雙單抗。

靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的能力，用戶可根據(jù)自己樣本中待檢指標的含量/濃度選擇合適的試劑盒，如果待檢指標含量很低，一般的試劑盒不能滿足要求，建議選擇高敏的ELISA試劑盒。

科學實驗講求重復性，ELISA試劑盒，其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應該控制在15%以內(nèi)。

試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下，實驗時間越短，操作越便利，越容易受到用戶歡迎。

一個品牌不光要有度，更重要的是美譽度。通過行業(yè)調(diào)查公司以及網(wǎng)絡，相關宣傳資料等可以找到美譽度高的ELISA試劑盒供應商，這個反映的不僅是產(chǎn)品質(zhì)量的問題，對供應商的售前售后服務也是一個非常嚴格的檢驗。

常見的高美譽度品牌進口的有R&D、Raybiotech、Merck-Millipore、Sigma-Aldrich、Thermo等，國產(chǎn)的有義翹神州、博奧森、neobioscience等。

產(chǎn)品的文獻引用特別是高質(zhì)量的SCI文章引用是很多用戶都關心的問題，這是業(yè)界對產(chǎn)品認可的一個非常重要指標，而且對相關用戶的科研有一定的借鑒作用。

ELISA盒子使用技巧

樣本的準備：盡量使用新鮮樣本，不使用有溶血，被細菌污染、標本保存時間過長和標本凝固不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標本，如不能立即測定，5天之內(nèi)應4℃保存，對于1周后檢測的樣本應低溫凍存；做好分裝，長時間凍存的樣本避免反復凍融。

仔細閱讀說明書：所有操作嚴格按照說明書。

不同批次的試劑不要混用，檢查各組分的有效期。

預包被的酶標板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上，這樣做的目的能使反應微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需溫度，預防后續(xù)實驗中由于孵育溫度或是時間不夠充分，而將一些弱陽性樣本不能檢出。

待測樣本加樣：待檢樣本過多時，建議分批操作；需要稀釋的樣本提前做好稀釋，注意選對合適稀釋液；控制好加樣時間，避免加樣費時過長造成誤差；注意加樣角度，垂直加入孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。

溫育和洗板：溫育時間和溫度一般根據(jù)試劑盒的說明書進行選擇。①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；②洗板機洗板時應經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢。

顯色：市售ELISA試劑盒中，一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液，反應條件為37℃或室溫反應15～30 min。顯色反應需要避光。

讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析：終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成，讀取OD值時酶標儀需先預熱15～30 min再進行。標曲的相關系數(shù)（R2）一般需要大于0.99。

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