胎牛血清有必要熱滅活嗎

— 胎牛血清有必要熱滅活嗎 —

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目的

血清的滅活就是將血清置于56℃作用30min，然后將它們分裝儲存于-20℃。熱滅活的目的是為了去除血清中的補體等對熱敏感的物質，以排除對免疫分析的影響。胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。研究人員曾對商業胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發現胎牛血清中含有的C1、C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%，至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結果。此外，多數實驗室在培養前將培養液進行預熱的過程，也對熱敏的補體有滅活的作用。因此，胎牛血清在大部分的細胞培養中是不需要滅活的，但在免疫學研究中，培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

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負面影響

雖然熱滅活可以去除血清中的一些物質，減少免疫球蛋白的細胞毒性而不破壞多肽生長因子，但同時也會對一些血清中較不穩定的成分進行破壞，如生長因子和氨基酸。熱滅活通常會降低血清支持細胞生長的能力，并且對血清的加熱經常導致血清中沉淀的產生（這些沉淀主要是析出的纖維蛋白以及脂蛋白），而導致的沉淀又常常被認為是微生物的污染。注意到這個現象后，為了驗證污染的存在或促進沉淀的溶解，許多培養者往往將血清放置37℃溫育，這將會導致情況變得更糟，因為血清中的蛋白質會進一步的析出，再次破壞血清的營養成分。而為了確定血清未被污染所進行的鏡檢，無菌培養實驗以及革蘭氏染色實驗更是浪費了實驗者大量的時間以及精力，給用戶以及供應商帶來不必要的麻煩。

— 結論 —

綜上所述，除了在免疫學研究中為排除補體的干擾需要對血清進行滅活外，多數細胞培養時血清的熱滅活并不是必要的。我們建議，對于那些對血清進行滅活的用戶，需要通過對比試驗來證實其必要性，并確定滅活的適當條件；此外，在滅活過程中，需要嚴格認真監測，并選擇一個可重復的方案進行操作。