腎小球分離、移植培養

SD 大鼠頸椎脫臼法處死，75%乙醇浸泡 1～2 分鐘，2 次，置超凈臺內，打開腹腔取出腎臟剪碎，置含 Hank's 液的無菌培養皿洗滌，置 80 目不銹鋼篩網上。

用扁平自制小鏟輕輕碾磨產物微小組織透過篩網，濾過組織 Hank's 液混合物用吸管吸至120目不銹鋼篩網，濾過，去小組織塊，濾過物吸至200目不銹鋼篩網，輕輕濾過， Hank's液洗滌 次， 收集網上腎小球， 鏡下觀察為分離良好的腎小球。腎小球用 0.2%胰酶、0.1%膠原酶，37℃消化20 分鐘，加血清終止胰酶反應，離心除去膠原酶。處理過的腎小球計數后接種至24孔培養板或25ml培養瓶，使腎小球大于60個/cm2，加培養基5～10ml（培養基組成：F12—3T3 上清 1：1；5% 馬血清；2.5%胎牛血清；胰島素 5μg/ml；25ng/ml 氫化松；5μg/ml轉鐵蛋白；25ng/ml 前列腺素 E1；甲狀腺素 0.02ng/ml；D-纈氨酸 150ng/ml）腎小球培養 8～10 天，去除腎小球未生長組分，細胞繼續培養 24 小時，形態學觀察：細胞生長成單層多角型細胞，直徑約 100μm。