細(xì)胞培養(yǎng)中的“黑點(diǎn)”

首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁，如果變渾濁，基本可以確定是污染；如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片（可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的），也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。

掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，不要細(xì)胞長老了再傳代；掌握好消化時(shí)間，防止消化過度產(chǎn)生細(xì)胞碎片；減少血清等試劑的凍融次數(shù)；將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳；嚴(yán)格控制水質(zhì)和器皿的清潔。

如果判定黑點(diǎn)是污染，請及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進(jìn)行：

如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心（500-600 rpm/min，5-6 min）并更換新的培養(yǎng)瓶；如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時(shí)候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心（500-600 rpm/min，5-6 min）并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當(dāng)增加血清濃度進(jìn)行培養(yǎng)。