關(guān)于WinSera血清熱滅活問題

更新時間：2022-08-18

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關(guān)于WinSera血清熱滅活問題

1. 為何會有熱滅活血清呢？

加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清。

2. 血清熱滅活是否必要？

血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立，至今成為很多實驗室的常規(guī)血清前處理步驟；但許多先前認(rèn)為必須熱滅活的原因，卻早已經(jīng)不再成立：

去除支原體污染?
早期血清加工使用的450nm濾膜，早已被100nm濾膜取代；且隨著加工技術(shù)的創(chuàng)新及嚴(yán)格的監(jiān)控，血清產(chǎn)品早已沒有支原體污染的疑慮。
去除補體等對熱敏感的物質(zhì)?
胎牛血清中含有的補體僅為成年牛血清5-50％，而C3（補體中引起免疫反應(yīng)的主成分）在胎牛血清中則幾乎不能檢出，直接使用血清對大多數(shù)的細(xì)胞株沒有負(fù)面影響。

實驗顯示，大多數(shù)的細(xì)胞不需要熱滅活血清，對于非必須的細(xì)胞來說血清滅活對于細(xì)胞生長只有微小甚至無任何作用，還可能造成生長速率降低，沉淀物還會顯著增多，不利于細(xì)胞觀察。因此，若非必須，不需要對血清進行滅活處理。

3. 血清熱滅活對細(xì)胞生長有幫助嗎？

細(xì)胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對各種細(xì)胞株的生長能力影響，發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中，熱滅活對6 株細(xì)胞有負(fù)面影響（紅）、3株無影響（綠）、2株有微弱正面改善（黃）。

▲ 使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長狀況

所以，在正常操作下，熱滅活通常對“細(xì)胞生長"沒有明顯的促進作用，反而會破壞血清內(nèi)生長因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，降低細(xì)胞增殖速度。

4. 血清熱滅活的缺點？

若實驗員設(shè)錯水浴溫度或忘記按計時器，都會導(dǎo)致過高的加熱溫度（下圖）或過長的加熱時間（下圖），進而大大降低血清的功能，影響細(xì)胞生長的表現(xiàn)。

缺點1：

▲ 過高的加熱溫度降低大多細(xì)胞株生長速度（僅一株未受明顯影響）

缺點2：

▲ 過長的加熱時間降低大多細(xì)胞株生長速度

（僅一株未受明顯影響）

滅活加熱過程會增加血清的沉淀狀況，而沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染，進而耗費大量時間及精力驗證是否污染，導(dǎo)致實驗一再拖延。

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