什么是細胞支原體污染？怎么辦？

支原體污染一直是細胞培養的“頭號敵人"，但是支原體的存在卻十分普遍，它的“不請自來"總是讓我們措手不及。世界上有近60%的實驗室正在遭受支原體污染的困擾，今天就讓我們來好好認識這個“刺頭"吧！

什么是支原體？

支原體結構簡單，具有高度多形性、無細胞壁、增殖緩慢、可在人工培養基中存活并增殖的特點。除此之外，它的“個頭"很小，只有0.1-0.3um，可通過一般的濾菌器。支原體主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成絲狀后斷裂呈球桿狀顆粒。大部分支原體繁殖速度比細菌慢，適宜生長溫度為35℃，最適pH值為7.8～8.0。在固體培養基上培養時，形成典型的“荷包蛋"狀菌落。

支原體是如何“欺負"細胞的？

我們知道一株被支原體污染的細胞是無法用來做實驗得出準確的實驗數據的--一方面是因為支原體本身也是一種原核細胞生物，相當于一種交叉污染；另一方面，細胞感染支原體后，由于支原體大量消耗培養基中的營養和細胞代謝的基礎成分，包括核酸前體、氨基酸、維生素、脂質、膽固醇等，導致細胞增殖緩慢及各種代謝、功能紊亂甚至喪失；除此之外，支原體還會吸附在細胞表面，破壞細胞膜的完整性，更有少數類型支原體可進入細胞內，如發酵支原體、生殖支原體和肺炎支原體。

如何“確診"細胞支原體污染？

支原體污染之所以讓廣大科研人員頭疼，是因為它在普通光學顯微鏡下難以被發現，并且細胞被污染早期不會表現出明顯的“癥狀"。

一般來說，如果培養過程中細胞增殖突然變慢，培養基中黑點、碎片明顯增多，培養基PH變化（變黃）周期變短，那么細胞很可能已經感染了支原體。這時候，就需要使用各種檢測手段來確認。目前常用的方法有：DNA染色法，支原體培養法，PCR法（包括凝膠電泳和熒光定量），化學發光法。前兩種方法結果可靠，但實驗周期長。PCR法原理是在支原體16S rRNA基因的保守區設計引物，通過檢測支原體DNA來檢測細胞中有無支原體的污染，得到的廣泛應用。

細胞“確診"支原體污染后，怎么辦？

如果您的細胞不幸感染了支原體，比較好處理方式是立即丟棄該細胞，并對培養箱、超凈臺等設施及場所進行消毒滅菌。因為支原體的傳播非常隱秘，相關研究表明其甚至能通過氣溶膠傳播。當然，如果您的細胞非常珍貴或者不能再獲得，可以嘗試使用抑制支原體的藥物進行處理，嘗試消除支原體污染。能抑制支原體的藥物有四環素；大環內酯類藥物，如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等；喹諾酮類藥物，如氧氟沙星、司帕沙星等。

這個過程一般周期較長，因為使用藥物處理時需配合多次大比例連續傳代來提高成功率。堅持，就是勝利！

千舍生物熱賣細胞：

人食道癌細胞 kyse30

人食管鱗癌細胞 kyse150

人食道鱗狀細胞癌 KYSE-410

人肝癌細胞 Li-7

人膠質瘤細胞 LN229

人前列腺癌細胞 LNCaP clone FGC

人結直腸癌細胞 lovo

人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株 LOVO/5FU

人結直腸癌細胞熒光素酶標記 LOVO+LUC

人結腸腺癌細胞 LS1034

人結直腸腺癌細胞 LS174T

人結直腸癌細胞 LS180

人結直腸癌細胞 LS513

人肝星形細胞 LX-2

人肝星形細胞+GFP LX-2+GFP

人肝癌細胞 Mahlavu

人乳腺上皮細胞 MCF-10A

人乳腺癌細胞 MCF-7

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞 MCF-7/Adr

人乳腺癌細胞熒光素酶標記 MCF-7+luc

人乳腺細胞 MDA-KB2

人乳腺癌細胞 MDA-MB-157

人乳腺癌細胞 MDA-MB-231

人乳腺癌X細胞+GFP MDA-MB-231+GFP

人乳腺癌細胞熒光素酶標記 MDA-MB-231+LUC

人乳腺癌細胞 MDA-MB-361

人乳腺癌細胞 MDA-MB-415

人黑素瘤細胞 MDA-MB-435S

人乳腺癌細胞 MDA-MB-436

人乳腺癌細胞 MDA-MB-453

人乳腺癌細胞 MDA-MB-468

人子宮頸表皮癌細胞 ME-180

人成巨核細胞白血病細胞 MEG-01

人膜間皮細胞 MET-5A

人骨肉瘤細胞 MG63

人胃癌細胞 MGC-803

人高轉移性肝癌細胞 MHCC-97H

人高轉移性肝癌細胞熒光素酶標記 MHCC-97H+luc

人高轉移性肝癌細胞 MHCC-97L

人胰腺癌細胞 MIA-PACA-2

人胃癌細胞 MKN-45

人胃癌細胞 MKN-74

人多發性骨髓瘤細胞 MM.1R

人多發性骨髓瘤細胞 MM.1S

人急性淋巴母細胞白血病細胞 MOLT-4

人急性單核細胞白血病細胞 MonoMac6

人胚肺成纖維細胞 MRC-5（有限細胞系）

人子宮頸表皮癌細胞 MS751

人急性淋巴母細胞白血病細胞 MT-4

人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞 MUM2B

人前B急性淋巴細胞白血病細胞 NALM-6

急性早幼粒細胞株 NB 4

人畸胎癌細胞 NCCIT

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1299

人肺腺癌細胞 NCI-H1395

人肺癌細胞 NCI-H1437

人非小細胞肺腺癌細胞 NCI-H157

人肺支氣管癌細胞 NCI-H1650[H1650]（MKN-1）