人卵巢癌細(xì)胞（CAOV-3）產(chǎn)品說明書

細(xì)胞名稱：人卵巢癌細(xì)胞（CAOV-3）

細(xì)胞介紹：細(xì)胞1976年建系，來源于一位54歲白人女性的卵巢癌組織。

細(xì)胞特性：

1）來源：人，卵巢癌組織

2）形態(tài)：貼壁，上皮樣細(xì)胞

3）含量：>1x106

4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；P/S雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

卵巢癌是哪些因素引起的呢？

1、家族遺傳

卵巢癌是具有遺傳性的，尤其是染色體顯性遺傳，是會(huì)大大增加女性卵巢癌風(fēng)險(xiǎn)的。家里有母親患卵巢癌的情況，女兒患卵巢癌的可能性就會(huì)變大。

2、激素影響

激素對(duì)卵巢上皮細(xì)胞有一定的刺激作用，比如雌性激素和雄性激素，如果過多地使用含有雌性激素的藥物，比如避孕藥，是可能增加患卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)的。

3、患有不孕癥

存在不孕癥的女性患者卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)是比較大的，因?yàn)椴辉邪Y說明女性可能存在一定的婦科疾病，未及時(shí)得到治療就會(huì)誘發(fā)卵巢癌。

4、子宮內(nèi)膜異位癥

患有子宮內(nèi)膜異位癥的患者，卵巢癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加，尤其是在月經(jīng)期間，沒有簡單的方法來將血液排出體外，就可能出現(xiàn)疼痛癥狀，患卵巢癌的可能性也就越大。

5、年齡因素

人在年齡逐漸增大的同時(shí)，身體細(xì)胞和器官開始老化，在飲食不健康和生活不衛(wèi)生情況的影響下，就可能導(dǎo)致卵巢癌的發(fā)生。

卵巢癌患者會(huì)有哪些癥狀表現(xiàn)呢？

1、月經(jīng)紊亂

部分的卵巢癌患者會(huì)出現(xiàn)月經(jīng)不正常的情況，當(dāng)卵巢癌細(xì)胞逐漸增多的時(shí)候，就會(huì)大大的影響女性的卵巢功能，使患者出現(xiàn)月經(jīng)量減少或者是不來月經(jīng)的癥狀表現(xiàn)。

2、腹脹

卵巢癌患者會(huì)有腹脹等腸胃不適的表現(xiàn)，因?yàn)槟[瘤在增長的同時(shí)，會(huì)擠壓到周圍的組織，導(dǎo)致腹腔和胸腔受到一定的壓迫，從而表現(xiàn)出腹脹的癥狀。

3、劇烈腹痛

當(dāng)腫瘤細(xì)胞在增長的過程中出現(xiàn)破裂、扭轉(zhuǎn)等情況時(shí)，是可能產(chǎn)生劇烈的腹部疼痛感覺的，在出現(xiàn)這個(gè)癥狀時(shí)，要及時(shí)的去醫(yī)院治療，以免造成不必要的影響。

4、下肢水腫

卵巢腫瘤隨著體積增大到一定程度的時(shí)候，是會(huì)壓迫到盆腔靜脈的，從而導(dǎo)致血液流通不暢、下肢水腫等情況的出現(xiàn)。

以上這些就是常見的卵巢癌病因和癥狀表現(xiàn)，女性應(yīng)該做好預(yù)防措施，尤其是在患婦科疾病時(shí)，要及時(shí)的采取措施來治療，以免誘發(fā)卵巢癌。患卵巢的女性還要注意飲食和生活習(xí)慣上的調(diào)整，幫助疾病更快地恢復(fù)。

人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 5-8F 1640+10%FBS+1%P/S   貼壁生長

人鼻咽癌細(xì)胞 C666-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

人鼻咽癌細(xì)胞 NPC/HK-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人卵巢癌細(xì)胞 A2780 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S  

人卵巢癌細(xì)胞+GFP A2780+GFP 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S  

人卵巢腺癌細(xì)胞 CAOV-3 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞 CoC1 1640+10%FBS+1%P/S  

人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞 ES-2 McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞 HEY DMEM+10%FBS+1%P/S  

人卵巢癌細(xì)胞 HEY A8 DMEM+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S

人正常卵巢上皮細(xì)胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN） 1640+10%FBS+1%P/S

人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S

人卵巢腺癌細(xì)胞 OVCAR-3 1640(含NaHCO3 1.5g/L)+20%FBS+1%P/S + 0.01mg/ml牛胰島素

人卵巢癌細(xì)胞 SK-OV-3 Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞 ID8 DMEM+10%FBS+1%P/S  

倉鼠卵巢細(xì)胞 CHO DMEM+10%FBS+1%P/S

倉鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷 CHO/dhFr- IMDM+10%FBS+P/S1%+0.05mM次+0.016mM胸腺嘧啶+100nM氨甲喋呤。

中國倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1 F12K+10%FBS+1%P/S

中國倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸浮） CHO GROW CD2培養(yǎng)基+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

中國倉鼠卵巢細(xì)胞 CTLA4 IG-24 DMEM+10%FBS+0.2mM脯氨酸+0.001mM氨甲蝶呤+1%P/S

倉鼠卵巢細(xì)胞 LEC-1 MEMα+10%FBS+1%P/S