無(wú)外泌體血清該如何制備？

　　外泌體是指含有復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜囊泡(30-150nm)。如今，它們特指直徑為40-100nm的盤狀囊泡。作為細(xì)胞間通訊的重要媒介，它作為信使，為細(xì)胞和細(xì)胞外環(huán)境傳遞信息，保證機(jī)體的正常工作。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞而言，用于體外培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基必須在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加胎牛血清（FBS）作為生長(zhǎng)添加劑。然而，常用的FBS通常來(lái)自牛血清，其中含有大量的牛外泌體和外源性細(xì)胞外囊泡。這些外泌體含有牛相關(guān)蛋白或miRNA和其他分子。在研究相關(guān)細(xì)胞自身分泌的外泌體時(shí)，牛血清中的外泌體可能會(huì)造成嚴(yán)重的背景問題，從而影響或干擾結(jié)果的判斷。在細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)、細(xì)胞分泌的外泌體等相關(guān)研究中，血清中所含的外泌體會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生巨大的干擾作用。

　　

　　無(wú)外泌體血清*可以滿足外泌體研究中對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)條件的要求。以優(yōu)質(zhì)胎牛血清為源血清，經(jīng)特定方法處理后，血清中外泌體去除率達(dá)到97%以上。通過細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，含有外泌體freefbs的培養(yǎng)基支持大多數(shù)細(xì)胞的生長(zhǎng)。與含有正常血清（FBS）的培養(yǎng)基相比，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和存活有相同甚至更好的促進(jìn)作用。
 

　　

　　制備無(wú)外泌體血清常用的方法是超速離心。主要有三種方法：將血清與培養(yǎng)基按1:4比例稀釋，然后超速離心10000g過夜收集上清液；血清10000g直接離心過夜；以180000g離心3-6小時(shí)。隔夜離心時(shí)間視情況而定，一般在10-14小時(shí)之間。

　　

　　需要注意的是，離心后，外泌體會(huì)在試管底部富集。吸上層血清時(shí)不要接觸底部沉淀物。上層血清約80%被吸收，剩余的混濁血清留作其他非外泌體細(xì)胞的培養(yǎng)。對(duì)于超速離心后的血清，可以檢測(cè)粒徑（離心前后的樣品）。如果純度不夠，則將離心后收集的血清進(jìn)行第二次超速離心。

　　

　　無(wú)外泌體血清使用注意事項(xiàng)：

　　

　　1、產(chǎn)品冷凍后，高豐度蛋白會(huì)形成晶體，NTA檢測(cè)時(shí)會(huì)出現(xiàn)異峰，屬正常現(xiàn)象。

　　

　　2、本產(chǎn)品已滅菌，可直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。使用前請(qǐng)將產(chǎn)品置于2-8℃自然解凍，或分裝后于-20℃保存，但不要反復(fù)凍融。

　　

　　3、請(qǐng)勿使用本產(chǎn)品進(jìn)行高溫?zé)釡缁睢?/div>