細胞培養(yǎng)過程中應(yīng)該注意哪些問題？

 細胞培養(yǎng)過程中應(yīng)該注意哪些問題？

#1細胞培養(yǎng)步驟一般包括：解凍、培養(yǎng)、分盤、凍存。基本上都遵循這個步驟，細胞轉(zhuǎn)染過程，我們往往發(fā)生在步驟3，在做細胞功能性實驗時，往往在步驟2，解凍和凍存就是細胞的儲藏和分離的過程。

#2首先我們要獲得細胞，一般受大家比較認可的細胞庫有1962年ATCC建立的CELL LINES、中科院、DSMZ等機構(gòu)。

#3細胞解凍要求37度快速解凍，另外就是注意不同細胞的培養(yǎng)條件。

#4同規(guī)格培養(yǎng)器皿所需要的細胞生長密度也不同，如下圖：

#5細胞生長會產(chǎn)生各種代謝廢物，造成培養(yǎng)液PH變化，所以培養(yǎng)過程中，遇到細胞培養(yǎng)液變化較為明顯時，要及時更換培養(yǎng)液，保證細胞的正常生長。

#6細胞離心時也要注意，強烈的離心力會使得細胞大量積聚離心管底部，造成大量細胞擠壓破碎，一般不要超過300g，5-10min即可。

#7此外離心機分為固定轉(zhuǎn)角離心機和自由轉(zhuǎn)角離心機，固定轉(zhuǎn)角的離心機會使細胞堆積在側(cè)壁，容易造成一些細胞離心不充分，造成細胞的丟失，相反，自由轉(zhuǎn)角離心機能很好解決這個問題所以，我們一般盡量使用自由轉(zhuǎn)角離心機。

1、細胞系（細胞株）

細胞系是來自多細胞生物體的細胞群體，其通常不會無限增殖，但是由于突變，逃避了正常細胞的衰老，從而可以持續(xù)分裂的一種細胞的集合。

因此，細胞可以在體外長時間生長。細胞系是研究多細胞生物體的生物化學和細胞生物學的非常重要的工具，例如信號通路、腫瘤殺傷、細胞增殖、細胞周期、突變分析、基因表達、蛋白表達、細胞分化等等。此外，永生化的細胞系也已經(jīng)在生物技術(shù)中得到應(yīng)用，比如建立新來源、新突變的細胞系。

2、克隆細胞株

從一個經(jīng)過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。再由原細胞株進一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細胞群，亦可稱之為亞株。

3、二倍體細胞

細胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細胞染色體數(shù)相同或基本相同（ 2n 細胞占 75%或 80%以上）的細胞群，稱二倍體細胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細胞系。

但隨供體年齡和組織細胞的不同，二倍體細胞的壽命長短各異。人胚肺成纖維細胞可傳50代±10代，人胚腎只有8—10代，人胚神經(jīng)膠質(zhì)細胞15—30 代；如從老齡個體取材培養(yǎng)，則細胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細胞系可供研究衰老之用。為保持二倍體細胞能長期被利用，一般在初代或 2— 5 代即大量凍存作為原種，用時再進行增殖培養(yǎng)，用后再繼續(xù)凍存，可供長期使用和延緩細胞的衰老。

4、初代培養(yǎng)（原代細胞培養(yǎng)）

原代培養(yǎng)是從供體獲取組織后的第一次培養(yǎng)，其優(yōu)點是：組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下（年齡、性別），在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。原代培養(yǎng)所在機能上的改變，主要是表型上的改變，不一定為體細胞突變。從理論上講，人們有可能創(chuàng)造出一種條件，使原代培養(yǎng)細胞恢復(fù)體內(nèi)時的機能，因此原代培養(yǎng)細胞是研究基因表達的理想系統(tǒng)。采用原代培養(yǎng)細胞做實驗，如藥物測試等效果也很好；原代培養(yǎng)也是建立各種細胞系（株）必須經(jīng)過的階段。有一點也要注意到，原代培養(yǎng)的組織是由多種細胞成分組成的，比較復(fù)雜。

即使培養(yǎng)的是較純的單一類型的細胞，如上皮或成纖維細胞，也仍存在著異質(zhì)性，在分析細胞生物學特性時仍有一定困難。此外由于不同供體不同批次差異及其它一些原因，細胞生長效果有時也會不一致。

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