NTC胎牛血清出現顏色或沉淀的問題

NTC胎牛血清出現顏色或沉淀的問題

NTC胎牛血清

貨號：SFBE

阿根廷

1、問：我用的是四季青的胎牛血清，56℃30分鐘滅活后出現了白色少量絮狀沉淀，是不是污染？還能不能 再用？血清的生產日期是2006年7月(現在是2007年6月11日)。

答：應該問題不大。你可以取少量血清放入培養皿中，37℃過夜培養看看就知道是否污染了。血清中沉淀 物的出現有許多種原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在 血渭解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。 若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起過濾。

2、問：我用MTT法測細胞的增殖，用DMSO裂解細胞，發現把DMSO加入到孔中就會形成乳白色(用的含胎牛血 清的1640培養基，由于沒有離板子的離心機，所以沒有去除培養基直接加的DMSO)。以前用含小牛血清的培養基沒有 看到有這種情況。該怎么解決？

答：為什么要用離心機離心呢？難倒你養的是懸浮細胞嗎？如果是貼壁細胞的話直接將MTT倒掉，再加DMSO 即可，我們就是這么做的，效果很好！并且測細胞的增殖的話如果不去掉MTT就加DMSO的話誤差應該很大！有時不一定就是血清的原因，可能跟你的MTT放置的時間或以及其他成分有關！

原代培養：

當采用外科操作的方法將細胞從有機體中分離下來，然后置于合適的培養環境中，它們會附著、分裂和生長。這稱為原代培養。

原代培養有兩種基本的方法。

第一種，使用外植塊，將小片的組織粘附到玻璃或經處理的塑料培養瓶中，并浸于培養液中。幾天之后，單個細胞將從組織外植塊中移動到培養瓶的表面或基質中開始分裂生長。

第二種方法，也是使用更廣泛的方法，通過在組織碎片中加入消化（蛋白水解）酶，如胰酶或膠原酶，消化成團聚集的細胞從而加快這一步驟。最終得到單細胞的懸液，然后將其置于含有培養液的細胞培養瓶內，讓其繼續生長分裂。這種方法成為酶解。

3、問：(1)GIBCO胎牛血清500ml，今天解凍后沒有混勻直接分裝，結果使得前面的幾管是清亮的，后面就 帶有棕色的，不知有沒有影響？估計有什么影響？前面的成分好還是棕色的成分好啊？

答：肯定有。最好還是重新混合重新分裝，我覺得有效成分會集中在棕顏色部分。

問：(2)為什么會出現棕色呢？

答：血清中的棕色多一些可能是因為紅蛋白的含量高些的緣故吧。

問：(3)血清滅活之后可以存放嗎？我的是前天mie活的，但是沒有加到培養基里，而是放在冰箱里，那下次 可以直接用嗎？還是再次滅活啊？

答：當然可以，如果多的話，分裝后最好放在－20℃，下次用時再解凍，也不用再滅活。最好用一管拿一 管，少許血清可以放在4℃。分裝時還要注意不要裝得太滿，以免溢出污染。

關于心肌細胞元代培養的FBS問題：

 (1)1%的血清wan全培養基可不可以，得看你胰酶的用量。但是在心肌細胞元代培養就不行。 10%的FBSwan全培養基效果都不太好，開始心肌細胞元代培養需要高濃度的FBS，20%左右，但這就有出現另一個問題，在FBSwan全培 養基中，成纖維細胞呈優勢細胞，須得在培養基加入適量的BrdU以抑制其生長，純化心肌細胞。

 (2)FBS的作用不僅僅是拿來中和胰酶，只是FBS中的一些蛋白質如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 。

 (3)元代心肌細胞培養的FBS使用，有講究：剛開始使用20%左右的高濃度的FBS，后逐漸遞減為無血清的 DMEM/F-12培養基培養。