血清解凍后出現的沉淀是個啥？

很多科研人員在血清解凍后會發現渾濁及絮狀物質,這時候大家難免會擔心:這血清是不是污染了，還能用嗎?帶著這個疑惑，繼續往下看........

血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體，是血漿去除纖維蛋白后的混合物，主要成分包括蛋白質、氨基酸、糖類、維生素和多肽（如生長因子、胰島素、促生長激素）等。血清是細胞培養過程中重要的營養物質，同時也對細胞起到一定的保護作用。

一、常見的幾種血清沉淀物

二、血清中的沉淀是什么？

用于細胞培養的各種血清產品中都存在各種類型的沉淀。除了膽固醇和一些蛋白沉淀之外，血清中也會含有纖維蛋白和磷酸鈣。雖然沉淀可引起初始問題，但在細胞培養應用方面，沉淀一般不會對血清的性能產生影響。

1、纖維蛋白

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產過程中,血清采集、過濾(3次0.1 um過濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成，此時血清中纖維蛋白原處于溶解狀態。但在解凍之后，血清中纖維蛋白原往往會發生凝集形成肉眼可見的沉淀。

2、磷酸鈣

常見的一種沉淀物，會造成血清渾濁,并且在37℃C培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,并且由于布朗運動看上去像在活動,因此經常被誤認為是微生物污染。

3、其他成分

血清中的其他成分也會形成沉淀,例如膽固醇和其他蛋白沉淀等。

三、血清沉淀是污染嗎？

無論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點樣的磷酸鈣，都容易被誤認為是細菌污染，但其實血清沉淀并不是污染。由于在37℃的溫度下培養，會加劇纖維蛋白的析出和磷酸鈣顆粒產生，可采用空培方式驗證污染，血清按所需比例加入無菌培養基中（不加雙抗），放培養箱中過夜，觀察空培外觀，若為澄清，則血清無污染。還可以通過將血清接種在細菌培養基上進行培養，觀察是否存在細菌增殖，并且進行革蘭氏染色，用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染。

三、血清沉淀會影響細胞生長嗎？

血清出現沉淀是血清的正常特性，各品牌的血清均有沉淀的出現，過于澄清的血清并不代表更高的品質，也可能是在加工過程中提前進行“預老化"，即反復凍融盡可能的去除纖維蛋白原的結果。

血清沉淀的多少與血清的使用效果沒有必然關系，血清沉淀并不會影響細胞的正常生長。

四、如何避免過多沉淀出現?

正確的使用和保存血清是避免沉淀產生的關鍵!

★非必須不用熱滅活(熱滅活會使血清中部分蛋白質變性析出影響血清品質)

★不宜37℃預熱,血清和wan全培養基通常室溫預熱即可

★避免反復凍融,分裝使用

★避免紫外線照射

★避免2-8℃長期保存,分裝后-20℃長期保存,按需融解使用

五、血清的正確解凍方法:

應按照逐步解凍的方式解凍血清:從-20°C取出后放置到4℃C融解。在解凍過程中,請注意時不時緩慢搖晃瓶子,減少沉淀的產生。注意直接室溫或者水浴融解都容易造成沉淀增多。

注意注意！！！血清融解過程約持續二十小時左右,所以記得在試驗前提前融解!

五、去除沉淀的方法?

如果血清中含有沉淀，不建議直接過濾血清。若去除這些絮狀沉淀物，可將血清分裝至無菌離心管中，以400g離心5min，去除大顆粒沉淀，上清液加入培養基內一起過濾。

六、總結:

綜上所述，在我們培養細胞的過程中，血清出現沉淀是正常情況，無論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點樣的磷酸鈣，都不是污染，且沉淀不會影響細胞的培養效果，可以放心使用。