鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化如何培養(yǎng)？

鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化如何培養(yǎng)？

貨號(hào)：WS-003Y（免疫熒光鑒定）

細(xì)胞詳述

腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成成分，能夠限制可溶性物質(zhì)和細(xì)胞等從血液進(jìn)入大腦。大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與外周內(nèi)皮細(xì)胞相比具有一些相同特性。

腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存在許多細(xì)胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗，延遲細(xì)胞旁的通量；腦微血管的內(nèi)皮細(xì)胞間銜接得十分緊密，不象其他組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞那樣有較大的縫隙腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏內(nèi)皮細(xì)胞的窗孔結(jié)構(gòu)，其液相物質(zhì)胞飲水平較低；腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有不對(duì)稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，從而產(chǎn)生 “兩極分化"的表現(xiàn)型。 與外周內(nèi)皮細(xì)胞相同，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)細(xì)胞粘附分子，調(diào)控白細(xì)胞進(jìn)入大腦。由于微血管內(nèi)皮細(xì)胞的器官特異性，內(nèi)皮細(xì)胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項(xiàng)：  收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1) 組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腦組織。

2) 細(xì)胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）免疫熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1) 1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿wan全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

推薦培養(yǎng)基

我們推薦使用鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞-永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基（WS-003Y-001A）作為體外培養(yǎng)鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)基。

貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

準(zhǔn)備和消化：在無菌條件下操作，將舊的培養(yǎng)基去除后，用PBS溶液輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞，去除殘留的血清成分。接著加入適量的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中消化2-3分鐘，直至細(xì)胞表面變得圓滑和亮澤。隨后加入含有10% FBS的培養(yǎng)基終止消化作用，輕柔吹打或振蕩培養(yǎng)皿，使細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中。

收集和傳代 ：將處理好的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，進(jìn)行輕度離心（室溫，1000rpm，5分鐘），以收集細(xì)胞。隨后，吸去上清液，加入適量的wan全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。按照預(yù)定的傳代比例（通常為1:2或1:3），將懸液中的細(xì)胞分別移植到新的培養(yǎng)皿中。標(biāo)記新培養(yǎng)皿上的細(xì)胞信息后，輕輕搖勻，將培養(yǎng)皿放置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行進(jìn)一步的培養(yǎng)。

懸浮細(xì)胞或半貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

直接傳代：將懸浮細(xì)胞在培養(yǎng)皿中沉淀后，吸取部分上清液，然后用吸管輕柔吹打以形成細(xì)胞懸液。最后將懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。這種方法適合于不需要酶消化的細(xì)胞傳代，操作簡(jiǎn)便，但可能會(huì)造成細(xì)胞損傷和損失。

離心方法：先將懸浮細(xì)胞懸液離心，去除上清液后用新的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后根據(jù)需要的傳代比例將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中。這種方法適合于細(xì)胞數(shù)量較多時(shí)，通過離心可以有效收集和分離細(xì)胞，有利于細(xì)胞的健康和穩(wěn)定傳代。

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