DC2.4 小鼠樹突狀細胞培養說明書

細胞名稱:DC2.4 小鼠樹突狀細胞培養說明書

貨號：WS20099（種屬鑒定）

規格：1×10?cells/T25培養瓶

細胞介紹

DC2.4是通過用表達鼠粒細胞-巨噬細胞CSF (GM-CSF)和myc和raf癌基因的逆轉錄病毒載體轉導C57BL/6小鼠的骨髓分離物而產生的永生化鼠樹突細胞。DC2.4表現出樹突細胞的特征，包括細胞形態和樹突細胞特異性標記的表達，以及吞噬和呈遞MHC類和II類分子上的外源性抗原的能力。樹突細胞(DC)是免疫系統的抗原呈遞細胞，在大多數組織中發現，特別是那些與外部環境接觸的組織(例如，皮膚和鼻、肺、胃和腸的內層)。最早于1973年描述，樹突狀細胞的主要功能之一是吞噬外來病原體，并將加工后的抗原呈遞至幼稚T細胞，以調節適應性免疫反應。樹突狀細胞還表達Toll樣受體，并幫助調節先天免疫反應。盡管它們分布在大多數組織中，但DC在體內數量很少，并且在體外難以維持。這些困難限制了樹突細胞的研究。

一、細胞特性

1） 來源: C57BL/6小鼠 骨髓

2） 形態：上皮樣  貼壁和貼壁不牢（半貼壁半懸浮)混合生長

3） 含量：>1x10^6 細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

二、運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

三、培養基及培養凍存條件準備

1）準備RPMI 1640（推薦WS-P-0001）培養基；優質胎牛血清，10%；添加10ng/mL murine GM-CSF；雙抗，1%。

  血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養方式以隨貨說明書為準?。。。?/span>

1）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

2）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一)如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，吸出培養液，換 10ml新鮮培養液后繼續培養。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養。具體步驟如下：

1. 棄去培養液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上wan全培養基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加wan全培養基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基，細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯系。