MCF-7/ADR人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株培養手冊

細胞名稱：MCF-7/ADR人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株

種屬來源：人

組織來源：乳腺，乳房

生長特性：貼壁生長

細胞形態：上皮細胞樣

細胞代數：10代以內 

背景介紹：培養瓶中的培養基是不含藥物的，待細胞狀態良好，穩定生長時，（一般傳2代保種），可以用含加含400ng/ml的阿霉素藥物培養基來培養，期間會有少部分細胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液去掉即可。待細胞穩定生長傳2代后，使用的阿霉素藥物濃度可提高到500ng/ml，凍存時請不要在培養基中加藥物。

是否導耐藥基因：是

細胞規格：1x106cells/T25或1mL凍存管

支原體檢測：無

培養基：89%DMEM+10%FBS+1%PS+0.01mg/ml insulin+500ng/ml ADR

培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

一、細胞培養操作

TS25 觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養箱放置2-4h，以便穩定細胞狀態；細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養；shou次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿：

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-3 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，加2-3mlwan全培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

3. 將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。

凍存管  收到細胞后，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇；第三天換液并檢查細胞密度；一管細胞建議接種到6cm培養皿或者T25瓶；將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心5 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）。第三天換液并檢查細胞密度。

二、細胞凍存操作

   無血清凍存液，液氮儲存；待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例：

收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數。根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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