WinSera胎牛血清的使用要點

什么是胎牛血清？

    采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段，血中含有豐富的生長發育因子，非常適合各種細胞的培養。一旦胚胎發育wan全，這些因子自動消失。因此，8個月胎齡以上的牛胚胎，已接近足月，不能作為胎牛血清的原料來使用。

WinSera胎牛血清的使用要點

1.初次開封胎牛血清如何化凍？

胎牛血清常規儲存溫度為-20℃，如果更加長期保存可以-80℃保存。解凍的時候不建議直接放在常溫中（25-37℃）解凍，很容易產生絮狀沉淀，進而有可能影響血清品質。建議的方式為先由-20/-80℃轉移到4℃解凍，全部為液體后，再由4℃轉移到室溫。在解凍的過程中，需要隨時晃動，使血清內成分和溫度混合均勻，有助于減少沉淀的產生。解凍后，就可以把血清用15 mL或者50 mL無菌離心管分裝凍存啦，可以根據自己使用血清的頻率在4℃存放一管已化凍分裝的血清，方便經常配制培養基，在4℃也不可以存放太久，最好在一個月內用完。解凍后的胎牛血清不可以在37℃或者室溫存放太久，避免血清中重要的細胞生長因子失活而影響細胞狀態。

2.血清的用量
原則上血清添加量不宜太多，通常添加5%、10%、20%。大部分細胞正常培養使用10%的血清濃度，部分細胞原代提取時使用20%血清。具體某一株細胞適應的血清濃度，需要根據細胞特性、實驗目的摸索。

3.胎牛血清什么時候需要熱滅活？
這就涉及到什么是熱滅活。熱滅活一般是以56℃，30 min來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應有：溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。除了這些特殊實驗要求，常規細胞培養需要熱滅活嗎？通常來說，熱滅活對大多數細胞培養都不是必須進行的步驟，經此處理過的血清對細胞的生長作用很小，甚至可能會因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低，沉淀物增多等不好的影響。

4.更換血清的正確步驟。
養細胞的小伙伴經常會遇到同一個細胞需要更換血清的情況。如果將另一款血清配制的培養基直接用于細胞培養，可能會發現以前增殖很快的細胞突然變慢甚至逐漸脫壁死亡了。這種情況下，多數為細胞被以往的培養環境馴化，突然更換一個新的營養環境，哪怕是品質更好的血清，也可能會出現不適應的情況。通常來說，更換血清的時候我們會遵循梯度更換保證細胞可以適應。血清開始使用時，如果是重新復蘇細胞，建議用原培養體系進行細胞復蘇，待細胞狀態恢復后再進行測試。測試時不建議直接100%換成新血清體系進行培養，應按照比例梯度替換。例如，換液按照新舊體系1:3，第二次換液1:1，第三次換液3:1，而后全替換。針對一些對培養體系較為敏感的細胞，需進一步細化替換比例。

5.血清解凍以后出現了懸浮物是什么？還能繼續用嗎？

解凍以后如果發現有少量乳白色的絮狀或者點狀物質，這種主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質量，可用400×g離心5 min取上清。不會對細胞有太大的影響。

解凍后出現的絮狀沉淀

6.血清在使用前是否需要對血清進行過濾？
一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發現血清有懸浮物，則可將血清加入培養液內一起過濾，切勿直接過濾血清。

7.使用血清培養細胞以后，鏡下觀察到會動的“小黑點”會是污染嗎？

如果您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養基是否混濁，黑點是否做不規則游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現可能與以下幾種情況有關：

(1)細胞生長過程中自然破碎后的細胞殘骸；

(2)血清中的雜蛋白，可能是反復凍融的結果；

(3)配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點；

(4)培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。

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