細胞培養問題----沉淀

細胞培養問題----沉淀

當排除了污染后，細胞培養基的渾濁通常可以解釋為金屬、蛋白質和其他培養基成分的沉淀。沉淀物可能對細胞健康有害，因為他們可能通過整合作用等過程去除營養物質和其他需要的成分，從而改變培養基成分。

沉淀的原因

溫度變化

溫度是細胞培養中沉淀的主要原因之一。當暴露于端溫度變化時，高分子量的血漿蛋白會從溶液中沉降。熱失活和凍融循環會促進蛋白質的變性和沉淀。由于液體或復溶培養基在每次使用之間保持冷藏狀態，鹽可能會沉淀出來，特別是10倍或其他濃縮液中析出。

失水引起的濃度變化

如果培養基存在蒸發，培養基組分（包括鹽）的濃度將增加。在培養基的表面特別容易形成晶體沉淀。

鈣鹽

在制備無血清培養基時，組分的添加順序可能會導致不溶性分子的形成。鈣鹽特別容易沉淀。例如，CaCl₂和MgSO₄在溶液中反應形成CaSO₄晶體。高壓滅菌和pH值不穩定可能會加劇這一問題。

金屬元素補充劑

銅、鐵和鋅金屬元素是細胞生長所必需的，是無血清培養基的重要補充劑。其他血清成分的缺失可能會導致這些金屬在培養基中沉淀，產生一個對細胞有毒的環境。銅和鋅在氧化條件下更加容易沉淀。

污染

培養基渾濁可能是細菌或真菌污染造成的。

細胞培養中對沉淀的故障排除

溫度

有關培養基的最佳儲存和處理，應參閱制造商指南。避免重復的凍融循環。

鈣鹽

在逐個加入其他培養基組分之前，先將CaCl₂單獨溶解在去離子水中。

濕度

確保燒瓶和培養皿不存在蒸發。監測培養箱的濕度，密封培養器皿，防止干燥。

其他金屬

加入鐵結合蛋白轉鐵蛋白可防止鐵在培養基中沉淀。

污染

丟棄被污染的細胞并對培養箱體進行消毒。遵循良好的實驗室措施以避免污染。

有目的的沉淀

盡管通常在細胞培養中不希望有沉淀，但是沉淀可以用作上清液中蛋白質的純化策略。例如，硫酸銨沉淀法有時被稱為“鹽析"技術，用于從雜交瘤上清液或血清中純化抗體。