細胞培養那點事兒.....

    細胞培養做為生物學研究最基礎的技術之一，可以說是滲透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。細胞好不好，就看你懂不懂細胞培養的各種技術了。

?  原代培養

從原代組織中分離細胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和膠原酶）。

用無菌的解剖刀和剪子將組織剪成3~4mm小片，用平衡液（無鈣鎂離子）清洗組織碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg組織加入1ml胰蛋白酶）或者膠原酶（Collagenase，50~200單位/ml），孵育4-18h。離心取上清后，用平衡液清洗幾次后，用*培養基懸浮細胞，進行培養。

?  傳代培養

依據細胞生長的特點，傳代方法有3種：

1. 懸浮生長細胞傳代（離心法）

將懸浮細胞離心（1000 rpm， 3 min）去上清，收集沉淀物加新培養基，混勻后進行傳代培養。

2. 半懸浮生長細胞傳代（直接吹打法）

此類細胞（如Hela細胞）部分貼壁，但黏貼不牢，可用直接吹打法使細胞從瓶壁上脫落下來，進行傳代。

3. 貼壁生長細胞傳代（酶消化法）

去除瓶內培養液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液覆蓋整個瓶底為準）37℃靜置2-10min（顯微鏡下動態監測）。移去蛋白酶液，加入培養液反復吹打瓶壁細胞，離心將細胞沉淀用培養液制成細胞懸液。吸取1/10—1/40細胞懸液，接種于含有適量新鮮培養液的新培養瓶中進行傳代培養。

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細胞培養是一個不斷進步的過程，在平時做好積累，量變才會有質變。