細(xì)胞不貼壁的原因及解決辦法？

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中容易出現(xiàn)這樣或那樣的問(wèn)題，這些問(wèn)題都是在細(xì)胞生長(zhǎng)方面來(lái)說(shuō)，比如細(xì)胞的不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好，甚至死亡的原因，這些問(wèn)題使得細(xì)胞研究者很是頭疼，下面是針對(duì)這些問(wèn)題的原因和解決方法：

一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因：
1.胰蛋白酶消化過(guò)度 ；
2.支原體污染 ；
3.培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）；               
4.細(xì)胞老化 ；

5.接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 。

解決方法：
1.縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；
2.分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；
3.使用無(wú)菌酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2 ；
4.啟用新的保種細(xì)胞 ；
5.調(diào)節(jié)*佳接種細(xì)胞濃度。
二、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因：
1.培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ；
2.支原體污染；
3.蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解；
4.DNA污染 。
解決方法：
1.用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；
2.分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體；
3.用DNaseI處理細(xì)胞。
三、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢
可能原因：
1.由于更換不同培養(yǎng)液或血清；
2.培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞；
3.培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；
4.試劑保存不當(dāng)；
5.接種細(xì)胞起始濃度太低；
6.細(xì)胞已老化；
7.支原體污染 。
解決方法：
1.比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；
2.換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子；
3.用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；
4.血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；
1.增加接種細(xì)胞起始濃度；
2.換用新的保種細(xì)胞；
3.分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。
四、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)不好
可能原因：
1.細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；
細(xì)胞的接種量：接種量過(guò)低，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢；
細(xì)胞傳代時(shí)間過(guò)晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng)；
胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短：時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，細(xì)胞死亡；時(shí)間過(guò)短，細(xì)胞未*分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。
2.污染
支原體污染；
霉菌污染。
3.培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證；
選擇的培養(yǎng)基是否合適；
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無(wú)誤。
4.培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常；
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。
解決方法：
根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因，做出針對(duì)性的解決方案
1.注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；
2.避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；
3.要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；
4.注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。
五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因：
1.培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2；
2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大；
3.細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷；
4.培養(yǎng)液滲透壓不正確；
5.培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。
解決方法：
1.檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；
2.檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；
3.取新的保存細(xì)胞種；
4.檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓；
5.換入新鮮培養(yǎng)液。