耐藥細(xì)胞株是如何構(gòu)建的？

目前已知的體外建立耐藥細(xì)胞株的方法主要有以下幾種：大劑量藥物沖擊法、藥物濃度遞增法、藥物濃度遞增與大劑量藥物沖擊相結(jié)合法、轉(zhuǎn)基因結(jié)合藥物篩選法。其中藥物濃度遞增法和大劑量藥物沖擊法成為臨床建立腫瘤細(xì)胞化療耐藥模型的常用方法。

①藥物濃度遞增法是指最初使用低濃度的藥物刺激細(xì)胞，等待細(xì)胞適應(yīng)低濃度的環(huán)境之后，再略微提高藥物濃度，繼續(xù)等待細(xì)胞適應(yīng)目前的環(huán)境，經(jīng)過(guò)反復(fù)的培養(yǎng)和加壓，最終使細(xì)胞可以在高濃度的藥物環(huán)境下生存

②大劑量藥物沖擊法是在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)加入超高藥物濃度的藥物，但是孵育的時(shí)間很短，一般僅有幾分鐘，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至不含藥物的培養(yǎng)液中慢慢恢復(fù)，通過(guò)重復(fù)以上步驟最終篩選出高倍數(shù)的耐藥細(xì)胞株。

這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)：藥物濃度遞增法的優(yōu)點(diǎn)在于誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞的藥物劑量循序漸進(jìn)，細(xì)胞培養(yǎng)的外環(huán)境逐漸改變，細(xì)胞較易耐受, 狀態(tài)較好, 缺點(diǎn)在于誘導(dǎo)耐藥過(guò)程耗時(shí)很長(zhǎng)，且其化療藥物的作用方式與臨床上化療藥物大劑量短療程的化療原則存在一定的差異；大劑量藥物沖擊法的誘導(dǎo)的優(yōu)點(diǎn)是與臨床上大劑量化療藥物沖擊的治療方式相接近，但是缺點(diǎn)在于大劑量藥物沖擊法的藥物濃度很高，細(xì)胞培養(yǎng)由于外環(huán)境驟變，細(xì)胞可能難以耐受，細(xì)胞狀態(tài)較難控制，且耐藥性能不穩(wěn)定。

建立模型的評(píng)價(jià)方法主要有以下兩種：耐藥倍數(shù)的檢測(cè)；耐藥相關(guān)蛋白的檢測(cè)。①通過(guò)MTT、CellTiter-Glo發(fā)光法（CTG）測(cè)定藥物對(duì)親本細(xì)胞和耐藥細(xì)胞的IC50，計(jì)算耐藥指數(shù)。耐藥指數(shù)（Resistance index，RI）=耐藥細(xì)胞系IC50/親本細(xì)胞系IC50。②WB、PCR、流式、免疫學(xué)等多項(xiàng)方法檢測(cè)耐藥相關(guān)蛋白（P-糖蛋白、多藥耐藥蛋白1）的表達(dá)情況。

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人結(jié)直腸癌氟尿嘧啶耐藥株HCT15/Fu 1640+10%FBS+1%P/S +20ug/ml 5-FU 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸癌紫杉醇耐藥株HCT-15/Taxol 1640+10%FBS+1%P/S+500ng/ml紫杉醇 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株LOVO/5FU F12K+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞 MCF-7/Adr 1640+10%FBS+1%PS+500ng/mL ADR 貼壁生長(zhǎng)

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株 SW620/5FU L15+10%FBS +1%P/S   貼壁生長(zhǎng)

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