血清中的沉淀是怎么回事？

血清中的沉淀是怎么回事？

血清中含有豐富的營養(yǎng)物質，包括各種蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，其中一些物質在特定的條件下容易形成沉淀。無論血清產(chǎn)地、品質如何，血清凍融后產(chǎn)生沉淀是無法避免的，因此各類血清以及含有血清的產(chǎn)品都可能會產(chǎn)生沉淀。

一、血清沉淀是什么？

在血清解凍后發(fā)現(xiàn)渾濁及絮狀物質時，不必驚慌，這是正常現(xiàn)象。常見血清的沉淀物有以下幾種：

纖維蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾(3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時血清中纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集形成肉眼可見的沉淀。

磷酸鈣（Calcium Phosphate）

常見的一種沉淀物，會造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，并且由于布朗運動看上去像在活動，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。

其他成分（Other）

血清中的其他成分也會形成沉淀，例如膽固醇和其他蛋白沉淀等。 

二、血清沉淀是污染嗎？

前面提到過磷酸鈣在倒置顯微鏡下像小幅振動的小黑點，容易被誤認為是微生物污染，但其實血清沉淀并不是污染。

由于在37℃的溫度下培養(yǎng)，會加劇磷酸鈣顆粒產(chǎn)生，故空培血清驗證污染的方法也不太合理。

我們可以通過將血清接種在細菌培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，觀察是否存在細菌增殖，并且進行革蘭氏染色，觀察判斷是否為微生物污染。

三、血清沉淀會影響細胞生長嗎？

血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，各品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn)，根據(jù)逍鵬多年細胞培養(yǎng)測試經(jīng)驗，血清沉淀的多少與血清的使用效果沒有必然關系。
建議更換新批次血清的時候，取少量細胞進行試培養(yǎng)，以確定是否影響后續(xù)細胞生長。

四、為了減少血清絮狀物沉淀的出現(xiàn)，在使用過程中一定要注意以下細節(jié)：

1. 解凍血清時，建議不時將血清搖晃均勻，目的是使溫度及成分均一，減少絮狀物沉淀的發(fā)生；

2. 勿直接將血清由-20℃置37℃解凍，因為這樣溫度變化太大，很容易造成蛋白析出；建議將血清從冷凍室先移至2-8℃冰箱解凍，再放置于室溫進行全部解凍；

3. 嚴禁將血清在37℃長時間孵育解凍，否則血清可能會產(chǎn)生沉淀，同時，血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到破壞，從而影響到血清的品質；

4. 血清熱滅活容易造成沉淀物增多，若非必要，可以無需進行此步驟；

5. 若必須要做血清的熱滅活，也請遵循56℃，30min的原則，并且不時搖晃均勻，因為溫度過高，時間過久或者搖晃不均勻都會造成沉淀物的增多。

五、如何去除血清中沉淀

非生物污染因素產(chǎn)生的血清沉淀，不會影響血清本身的功能，但從使用體驗角度出發(fā)，大量的沉淀很容易遮擋視線，影響對培養(yǎng)基狀態(tài)的觀察；而微量沉淀又容易與細胞污染混淆，影響實驗人員的判斷。

因此，如果血清中有非生物污染的沉淀，想要去除，該如何操作呢？

我們推薦采用低速離心的方法：1000rpm以內，1-2分鐘，或簡單讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里。

一般不推薦過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾。

六、總結

血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見現(xiàn)象，無需過多擔心，并且不會影響血清的品質，對細胞培養(yǎng)而言，也是沒有任何問題的，您可以放心使用。