A549/吉西他濱細(xì)胞培養(yǎng)技巧

更新時間：2025-04-16

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產(chǎn)品名稱：A549/吉西他濱人肺癌吉西他濱耐藥株

種屬：人

組織來源：肺癌

生長形態(tài)：貼壁生長

形態(tài)特征：上皮細(xì)胞

支原體檢測：陰性

細(xì)胞背景：該細(xì)胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。

培養(yǎng)條件：90%RPMI—1640+10%胎牛血清+100nN吉西他濱

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細(xì)胞復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)中繞不過去的基礎(chǔ)操作，涉及到將液氮冷凍保存的細(xì)胞恢復(fù)到適宜的生長狀態(tài)。

（1）復(fù)蘇前將生物安全柜或者超凈工作臺進(jìn)行紫外滅菌30 min。并將含有10% FBS、1×青鏈霉素（100×）等的培養(yǎng)基、無菌1×PBS（pH 7.2~7.4）進(jìn)行37℃預(yù)熱。

（2）將預(yù)熱好的培養(yǎng)基提前加入到10 cm培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并取4 mL培養(yǎng)基加入到15 mL離心管中。

（3）從液氮罐中取出細(xì)胞凍存管，應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。迅速放入盛有37℃的水浴中，并不時搖動，盡快解凍。

（4）肉眼觀察全部化凍后，將細(xì)胞加入到提前準(zhǔn)備好的含有4 mL培養(yǎng)基的15 mL離心管中，并以1000 rpm，離心5 min。用75%酒精擦拭消毒后，移至超凈工作臺上，去除上清，迅速加入1 mL步驟（1）中的培養(yǎng)基，輕輕吹打重懸細(xì)胞，然后將細(xì)胞全部轉(zhuǎn)移至10 cm培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。

（5）以上下、左右各輕輕晃動5~10次，進(jìn)行“十"字法混勻細(xì)胞，放置37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中。

（6）次日更換一次培養(yǎng)液，觀察細(xì)胞狀態(tài)，再繼續(xù)培養(yǎng)。

（1）快速解凍：從液氮取出細(xì)胞凍存管后，應(yīng)立即放入37℃水浴鍋中，持續(xù)搖晃1~2 min直至解凍，以避免細(xì)胞死亡。

（2）稀釋冷凍保護(hù)劑：解凍后可用培養(yǎng)基稀釋含有冷凍保護(hù)劑（如DMSO）的細(xì)胞懸液，以減少其對細(xì)胞的毒性。

（3）輕柔處理細(xì)胞：在離心和重懸細(xì)胞時，應(yīng)避免劇烈攪拌或離心，以免損傷細(xì)胞。

（4）及時換液：復(fù)蘇后的細(xì)胞應(yīng)及時換液，一般在12~24 h換液，去除死細(xì)胞和代謝廢物，為細(xì)胞提供新鮮的營養(yǎng)物質(zhì)。

（5）使用優(yōu)質(zhì)血清：血清的質(zhì)量對細(xì)胞復(fù)蘇和生長至關(guān)重要，選擇內(nèi)毒素更低、質(zhì)量穩(wěn)定的血清可以提高實(shí)驗(yàn)成功率。

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