人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株（STR鑒定）
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細胞名稱：人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株（STR鑒定）

細胞代碼： LOVO/5FU

培養條件： F12K+10%FBS+1%P/S

生長狀態：貼壁生長

人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株（STR鑒定）

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37.如何從T25瓶中轉移sf9細胞？能用蛋白酶消化嗎？

我們推薦使用脫落細胞的方法，此技術破壞性最小，生活力最高。通過使用巴斯德吸液管，讓細胞上培養基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養瓶。只有在絕對必要的情況下，才使用胰消化細胞。

38.胰消化一個T25瓶的sf9細胞：

1. 去除培養基。

2. 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細胞表面）洗滌細胞，去除PBS。

3. 加入2ml 1x胰EDTA（恰好覆蓋細胞表面）。

4. 37 ℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。

5. 向細胞中加入2ml 細胞培養液，移入錐形管，用2ml培養液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養基中的FBS終止了胰的活性。）

6. 離心（1100rpm）沉淀細胞。去除培養基。

7. 用新的培養基重新懸浮細胞。傳代。

39.在Sf9, Sf21, 和high Five細胞懸浮培養時，肝素的使用量是多少？

為了防止懸浮培養細胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。

40.在重新凍存sf9細胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數的增加，它的感染能力會降低嗎？

通常情況當細胞經過30次傳代后，應該返回凍存。無論什么時候計數時，都應該檢查細胞活力。如果超過95％的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍，細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降，它們的感染力將不在是有效的。

41.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養基，在放置幾天后顏色變紫?

這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，碳酸氫納導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養箱孵育培養基10-15分鐘，來校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）。

42. 細胞培養基偶然被凍，可否繼續使用？

如果細胞培養基偶然被凍，您應該熔化培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生，培養基可以正常使用，如果出現沉淀，只能丟棄這些培養基。

43. 無血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎？

當在無血清培養基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養條件下，抗生素不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平。

44. 培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

45.培養基及其它添加物和試劑可反復凍融嗎？

大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。