細胞培養那點事兒.....

細胞培養做為生物學研究最基礎的技術之一，可以說是滲透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。細胞好不好，就看你懂不懂細胞培養的各種技術了。?原代培養從原代組織中分離細胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和膠原酶）。用無菌的解剖刀和剪子將組織剪成3~4mm小片，用平衡液（無鈣鎂離子）清洗組織碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg組織加入1ml胰蛋白酶）或者膠原酶（Collagenase，50~200單位/ml），孵育4-18h。離心取上清后，用平...

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細胞培養問題----沉淀

細胞培養問題----沉淀當排除了污染后，細胞培養基的渾濁通常可以解釋為金屬、蛋白質和其他培養基成分的沉淀。沉淀物可能對細胞健康有害，因為他們可能通過整合作用等過程去除營養物質和其他需要的成分，從而改變培養基成分。沉淀的原因溫度變化溫度是細胞培養中沉淀的主要原因之一。當暴露于端溫度變化時，高分子量的血漿蛋白會從溶液中沉降。熱失活和凍融循環會促進蛋白質的變性和沉淀。由于液體或復溶培養基在每次使用之間保持冷藏狀態，鹽可能會沉淀出來，特別是10倍或其他濃縮液中析出。失水引起的濃度變化...

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細胞培養及操作步驟

一、原代培養及其操作步驟原代分離細胞培養是指從供體內取出組織后，經機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環境，在無菌、適當溫度和一定的營養條件下，生存、生長和繁殖。原代培養細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養做各種實驗，如藥物測試、細胞分化及病毒學方面的試驗效果很好。其操作步驟如下。1.剪切組織先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術鑷去除黏附...

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27個細胞傳代培養常見問題

1、一般拿到細胞后，應該注意什么?收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒，放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時的培養基拍一張照片，觀察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各兩張)，排除細胞本身污染的情況。2、何時須更換培養基?視細胞生長密度而定，常規細胞2-3天更換培養基。3、細胞何時進行傳代較好?一般情況下細胞生長至*匯合后就應該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜...

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細胞生長不良常見原因及解決方案

細胞生長不良常見原因及解決方案儲存物解凍后無活細胞或活細胞少原因解決方案儲存培養物質量不佳確保正確識別了用于儲存的起始培養物，該培養物是健康的，無微生物污染的，并且處于生長的對數階段后期（80-90%匯合度）儲存物冷凍不當在液氮中冷凍細胞時2，請確保細胞、培養基和其他實際的濃度以及冷凍方案遵循供應商的建議。通常，應以每分鐘約1至3℃的速度緩慢凍結，以大程度地減少冰晶的形成。為細胞選擇最合適的冷凍保護劑。如果使用甘油，請勿將其儲存在光線下，因為光照會使甘油轉化為具有細胞毒性的烯...

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細胞生長緩慢的原因分析

轉載：細胞生長緩慢的原因分析：一.個別人的培養體系出現問題1.檢查你所培養的細胞是否存在污染。(a)如果培養細胞未添加抗生素(必須添加!),細胞污染則是不可避免的。1)用肉眼和顯微鏡進行檢查2)如果細胞被污染則要棄掉。(b)由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測(c)檢測可能污染的途徑和原因2.檢查你用于培養細胞的培養基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規使用的是粉劑或10X儲存液，而現在購買的培養基更換為1X液體，而隨后證明問題就出自于此，處理方法請參見...

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培養RAW264.7細胞常見問題及原因分析

在日常培養過程中發現RAW264.7細胞容易出現的問題主要為以下幾種：1.復蘇不易成功2.細胞形態變異明顯3.消化困難4.細胞生長緩慢，當你的細胞培養遇到上述瓶頸，不妨試一試以下幾種解決辦法。1、復蘇難以成功原因：RAW264.7對空間十分敏感，復蘇密度太高，細胞增殖太快，加劇細胞營養缺失，加速細胞老化。解決辦法：T75培養瓶復蘇細胞數量控制在104~1052、細胞變異明顯原因：細胞吞噬抗原過多、培養環境惡劣都會促使該細胞呈現梭形、長梭形解決辦法：改善細胞培養環境，例如與細胞...

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對于無外泌體血清你真的了解嗎？

胎牛血清(FBS)是大多數細胞培養的重要生長支持物，來自天然來源的FBS將包含大量囊泡，例如外泌體。由于FBS的外分泌經驗對研究結果有很大干擾，因此外泌體研究中必須使用去除外泌體后的FBS進行細胞培養。無外泌體血清專為外泌體研究而設計；通過過濾無菌收集的健康胎牛血清去除外泌體；胎牛血清中內源性外泌體去除率為97%；過濾可有效保護FBS中重要的細胞營養因子；exoFBS和普通FBS在細胞生長速率和形態上沒有差異。無外泌體血清不含多種由蛋白質編碼和調控的RNA，包括mRNA、mi...

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