原代細(xì)胞培養(yǎng)那些事兒

原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)1、組織塊培養(yǎng)法1）組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。2）加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。3）當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細(xì)胞的生長。4）為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。2、貼壁型原代細(xì)胞1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初...

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細(xì)胞培養(yǎng)那點(diǎn)事兒.....

細(xì)胞培養(yǎng)做為生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)之一，可以說是滲透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。細(xì)胞好不好，就看你懂不懂細(xì)胞培養(yǎng)的各種技術(shù)了。?原代培養(yǎng)從原代組織中分離細(xì)胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和膠原酶）。用無菌的解剖刀和剪子將組織剪成3~4mm小片，用平衡液（無鈣鎂離子）清洗組織碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg組織加入1ml胰蛋白酶）或者膠原酶（Collagenase，50~200單位/ml），孵育4-18h。離心取上清后，用平...

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細(xì)胞培養(yǎng)問題----沉淀

細(xì)胞培養(yǎng)問題----沉淀當(dāng)排除了污染后，細(xì)胞培養(yǎng)基的渾濁通常可以解釋為金屬、蛋白質(zhì)和其他培養(yǎng)基成分的沉淀。沉淀物可能對細(xì)胞健康有害，因?yàn)樗麄兛赡芡ㄟ^整合作用等過程去除營養(yǎng)物質(zhì)和其他需要的成分，從而改變培養(yǎng)基成分。沉淀的原因溫度變化溫度是細(xì)胞培養(yǎng)中沉淀的主要原因之一。當(dāng)暴露于端溫度變化時(shí)，高分子量的血漿蛋白會從溶液中沉降。熱失活和凍融循環(huán)會促進(jìn)蛋白質(zhì)的變性和沉淀。由于液體或復(fù)溶培養(yǎng)基在每次使用之間保持冷藏狀態(tài)，鹽可能會沉淀出來，特別是10倍或其他濃縮液中析出。失水引起的濃度變化...

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細(xì)胞培養(yǎng)及操作步驟

一、原代培養(yǎng)及其操作步驟原代分離細(xì)胞培養(yǎng)是指從供體內(nèi)取出組織后，經(jīng)機(jī)械以及消化分離成單個(gè)細(xì)胞或單一型細(xì)胞群，使之在體外模擬人體生理環(huán)境，在無菌、適當(dāng)溫度和一定的營養(yǎng)條件下，生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細(xì)胞常有不同的細(xì)胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細(xì)胞類型和表達(dá)組織的特異性特征。利用原代細(xì)胞培養(yǎng)做各種實(shí)驗(yàn)，如藥物測試、細(xì)胞分化及病毒學(xué)方面的試驗(yàn)效果很好。其操作步驟如下。1.剪切組織先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術(shù)鑷去除黏附...

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27個(gè)細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題

1、一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張)，排除細(xì)胞本身污染的情況。2、何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。3、細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?一般情況下細(xì)胞生長至*匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長都有一個(gè)要求不宜...

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細(xì)胞生長不良常見原因及解決方案

細(xì)胞生長不良常見原因及解決方案儲存物解凍后無活細(xì)胞或活細(xì)胞少原因解決方案儲存培養(yǎng)物質(zhì)量不佳確保正確識別了用于儲存的起始培養(yǎng)物，該培養(yǎng)物是健康的，無微生物污染的，并且處于生長的對數(shù)階段后期（80-90%匯合度）儲存物冷凍不當(dāng)在液氮中冷凍細(xì)胞時(shí)2，請確保細(xì)胞、培養(yǎng)基和其他實(shí)際的濃度以及冷凍方案遵循供應(yīng)商的建議。通常，應(yīng)以每分鐘約1至3℃的速度緩慢凍結(jié)，以大程度地減少冰晶的形成。為細(xì)胞選擇最合適的冷凍保護(hù)劑。如果使用甘油，請勿將其儲存在光線下，因?yàn)楣庹諘垢视娃D(zhuǎn)化為具有細(xì)胞毒性的烯...

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細(xì)胞生長緩慢的原因分析

轉(zhuǎn)載：細(xì)胞生長緩慢的原因分析：一.個(gè)別人的培養(yǎng)體系出現(xiàn)問題1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。(a)如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素(必須添加!),細(xì)胞污染則是不可避免的。1)用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查2)如果細(xì)胞被污染則要棄掉。(b)由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測(c)檢測可能污染的途徑和原因2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10X儲存液，而現(xiàn)在購買的培養(yǎng)基更換為1X液體，而隨后證明問題就出自于此，處理方法請參見...

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培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞常見問題及原因分析

在日常培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)RAW264.7細(xì)胞容易出現(xiàn)的問題主要為以下幾種：1.復(fù)蘇不易成功2.細(xì)胞形態(tài)變異明顯3.消化困難4.細(xì)胞生長緩慢，當(dāng)你的細(xì)胞培養(yǎng)遇到上述瓶頸，不妨試一試以下幾種解決辦法。1、復(fù)蘇難以成功原因：RAW264.7對空間十分敏感，復(fù)蘇密度太高，細(xì)胞增殖太快，加劇細(xì)胞營養(yǎng)缺失，加速細(xì)胞老化。解決辦法：T75培養(yǎng)瓶復(fù)蘇細(xì)胞數(shù)量控制在104~1052、細(xì)胞變異明顯原因：細(xì)胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會促使該細(xì)胞呈現(xiàn)梭形、長梭形解決辦法：改善細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，例如與細(xì)胞...

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